細(xì)菌DNA/RNA提取試劑盒

【產(chǎn)品名稱】

通用名    ：細(xì)菌DNA/RNA提取試劑盒（吸附柱法）

Name      ：DNA Extraction Kit（Adsorption column method）

【產(chǎn)品介紹】

本試劑盒可以從多種樣本中提取基因組DNA，包括動(dòng)物內(nèi)臟、肌肉組織、血液以及培養(yǎng)的細(xì)胞和細(xì)菌等。本法基于對(duì)基因組DNA具有高度選擇性的高分子膜材料，只需幾個(gè)步驟即可完成提取過(guò)程，在30分鐘內(nèi)完成高純度DNA的提取。

本試劑盒提取的DNA可以用于Real-time PCR、測(cè)序等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

【產(chǎn)品原理】

動(dòng)物內(nèi)臟、肌肉組織、血液以及培養(yǎng)的細(xì)胞和細(xì)菌等樣本在裂解液和蛋白酶K的作用下破碎并可使大部分蛋白質(zhì)變性，釋放出基因組DNA。在其所提供的合適的鹽離子和pH環(huán)境的作用下，與乙醇混合后，基因組DNA特異性地結(jié)合于膜上，大部分蛋白質(zhì)及其他雜質(zhì)在兩次洗滌過(guò)程中被洗下，而DNA與膜結(jié)合牢固，在洗脫液的作用下被洗下。

【試劑組成】

【試劑規(guī)格】50 T/盒。

【儲(chǔ)存運(yùn)輸】蛋白酶K保存于2~8℃。其余成分可室溫儲(chǔ)存。保存得當(dāng)可穩(wěn)定使用18個(gè)月。

【自備材料】

滅菌的1.5mL離心管、各種規(guī)格滅菌的槍頭、離心機(jī)（大轉(zhuǎn)速不小于14,000rpm）、無(wú)水乙醇、漩渦震蕩器等。

細(xì)菌DNA/RNA提取試劑盒【操作步驟】

蛋白酶K放于2~8℃冰箱保存，使用時(shí)取出。

1. 樣本處理

（1）全血：

a）如果全血體積大于200μL，請(qǐng)先使用紅細(xì)胞裂解液或淋巴細(xì)胞分離液收集細(xì)胞，然后用200μL PBS緩沖液或生理鹽水充分重懸，進(jìn)行步驟2。

b）如果樣本不足200μL，可以加入適量的PBS緩沖液或者生理鹽水補(bǔ)足200μL，進(jìn)行步驟2。

       c）從人血液中提取DNA的方法與從哺乳動(dòng)物血液中提取DNA的方法相同。

d）從鳥類血液中提取的DNA需將不多于20μL血液樣本，加PBS緩沖液至200μL，混合后開始提取，進(jìn)行步驟2。

（2）組織樣本：

每份組織分別從不同的三個(gè)位置稱取1g，用手術(shù)剪剪碎混勻后取約50mg置于研磨器中，加入0.5mL-1mL生理鹽水研磨，勻漿后轉(zhuǎn)入1.5mL滅菌的離心管，8000rpm離心2分鐘，取上清200μL加入1.5mL離心管，進(jìn)行步驟2。

（3）培養(yǎng)的細(xì)胞：

       懸浮細(xì)胞：細(xì)胞培養(yǎng)液3000rpm離心2分鐘，去上清，收集2×10⁶個(gè)細(xì)胞（容積200μL），轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管，進(jìn)行步驟2。

       貼壁細(xì)胞：去上清，收集2×10⁶個(gè)細(xì)胞（容積200μL），轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管，進(jìn)行步驟2。

（4）其他液體樣本：

1000rpm離心2分鐘 ，棄上清，收集沉淀，進(jìn)行步驟2。

（5）菌液：

       培養(yǎng)的菌液，5000rpm離心1分鐘，棄上清，收集至少2×10⁶個(gè)細(xì)菌，進(jìn)行步驟2。

1. 將200μL上述樣本和10μL 蛋白酶K加入一只新的1.5mL離心管，然后加入200μL 裂解液，震蕩混勻5-10秒。
2. 56℃溫育10分鐘。
3. 在上述離心管中加入200μL無(wú)水乙醇，充分震蕩混勻5-10秒(此步驟不可離心)。
4. 將步驟4混勻的液體吸取至一只套有收集管的吸附柱上（注意不要吸到懸浮的雜質(zhì)，以免阻塞吸附膜），6000-8000rpm離心1分鐘，棄去管內(nèi)液體。
5. 將500μL去蛋白漂洗液加入吸附柱中，10000rpm離心30-60秒，棄去管內(nèi)液體。
6. 將700μL 洗滌液加入吸附柱中，10000rpm離心30-60秒，棄去管內(nèi)液體。
7. 將吸附柱放回接液管上，13000rpm離心2分鐘。
8. 將吸附柱轉(zhuǎn)移到一只干凈的1.5mL離心管（不提供）中。
9. 向吸附柱內(nèi)加50-100μL 洗脫液，室溫靜置1分鐘，13000rpm離心1分鐘，棄吸附柱，離心管中液體含有基因組DNA。提純的DNA如果不立刻使用，請(qǐng)保存于-20℃。

【注意事項(xiàng)】

1. 本試劑盒適用于不多于200μL的全血基因組提取，大于200μL的血液建議用紅細(xì)胞裂解液或淋巴細(xì)胞分離液處理后將白細(xì)胞富集，然后進(jìn)行后續(xù)操作。

2. 適用于從動(dòng)物內(nèi)臟、肌肉組織、血液，以及培養(yǎng)的細(xì)胞和細(xì)菌等樣本提取DNA。

3. 新鮮血液存放于2-8℃中或者-20℃保存。

4. 提取的DNA含量少或者基本沒有的原因：

  1）樣本中細(xì)胞過(guò)少；2）蛋白酶K沒有保存在2-8℃，活性降低。

5．提取鳥類血液時(shí)，將樣本、蛋白酶K和裂解液混合后液體非常粘稠，需減少樣本使用量，20μL鳥類血液加入PBS緩沖液稀釋至200μL。