腸集聚性大腸桿菌（EAEC）熒光PCR檢測試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光PCR技術，設計一對腸集聚性大腸桿菌特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術對腸集聚性大腸桿菌的核酸進行體外擴增檢測。在反應體系中含基因組模板的情況下，反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道的信號強度進行實時監(jiān)測和輸出，實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性、定量分析。

腸集聚性大腸桿菌(EAEC)熒光PCR檢測試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：腸集聚性大腸桿菌(EAEC)核酸擴增檢測試劑盒(PCR 熒光探針法)

Name ：Enteroconcentric Escherichia coli (EAEC) nucleic acid amplification detection kit (PCR fluorescence probe method)

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預期用途】

本試劑盒適用于檢測水樣糞便等樣本中的腸集聚性大腸桿菌，用于腸集聚性大腸桿菌感染的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供參考。

【檢驗原理】

本試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術，設計一對腸集聚性大腸桿菌特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR 技術對腸集聚性大腸桿菌的核酸進行體外擴增檢測， 用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

【試劑組成】

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

4. PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內(nèi)；

4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；

5. 結(jié)果分析判定

【注意事項】

5.1 結(jié)果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析，當曲線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結(jié)果。

5.2 結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。

可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，且出現(xiàn)典型擴增曲線的樣本建議重復試驗，重復試驗

結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴增曲線者為陽性，否則為陰性。

陰性：樣本檢測結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴增曲線。

6. 檢測方法的局限性

1）樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關；

2）樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

3）陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會導致假陽性結(jié)果；

4）病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結(jié)果；

5）不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結(jié)果；

6）試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果；

7）本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

7. 質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品：無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

8. 產(chǎn)品性能指標

陰陽性參考品符合率：5 份陽性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合率為100％。

低檢測限：1.0×10 3copies/mL。

精密度：批內(nèi)、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)（CV）均小于等于 3%。

公司優(yōu)勢：
1）質(zhì)量：我司提供的的試劑為世界
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